PCR试剂盒使用前后的注意事项

　　PCR试剂盒里分好几部分，最重要的是PCR反应体系：DNA聚合酶，镁离子，引物（测2个基因和1个内标需要3对引物），探针（也要3对探针，发出三种波长的荧光），逆转录酶，dNTP（ATUCG会用部分U代替T），还有用于抗干扰的UDG酶（正常的DNA只有ATCG，PCR扩增出来的DNA会有AT（会用部分U代替T）CG，这样扩增出来的DNA链中有U，UDG酶能切断含U的DNA链，所以扩增DNA在空气中形成的气溶胶，不会影响其他样本）、RNA酶抑制剂（空气中液体里全都是RNA酶，会降解病毒的RNA）、Taq酶的抗体（Hotstart，常温下能抑制Taq酶的活性，PCR扩增时高温让其失活，Taq酶就在高温时恢复活性开始扩增了）。

　　PCR试剂盒注意事项

　　一、试剂盒使用注意事项

　　（1）所有试剂应按照适合温度储存。请勿反复冻融。

　　（2）使用后均需要对操作区进行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除剂等。耗材均需使用商品化的无酶耗材。

　　二、样本注意事项

　　（1）细胞在含/不含血清的环境中均可直接使用试剂盒。

　　（2）扩增2kb以内片段，细胞样品浓度不超过1000个细胞。如若扩增片段超过2kb，可适当提高细胞浓度。

　　（3）不同组织使用不同的眼科剪和眼科镊进行处理，防止交叉污染导致检测结果偏差。

　　三、试剂盒使用过程中注意事项

　　（1）PCR过程中推荐使用阴性对照和阳性对照。

　　（2）整个过程中使用的吸头、离心管等耗材应丢弃在含有75%乙醇或核酸消除剂的容器中，防止形成环境污染。

　　（4）PCR产物3’末端含有A，可直接进行TA克隆。

　　四、试剂盒使用后注意事项

　　（1）PCR反应完成后，严禁在实验区开盖。应在污染区进行琼脂糖凝胶电泳，防止气溶胶污染。

　　（2）为防止试剂盒污染，请勿将不同批号试剂盒混用。