小鼠P物质ELISA试剂盒​检测操作步骤

小鼠P物质ELISA试剂盒试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

检测操作步骤:

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

8.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

9.  灵敏度:*检测浓度小于1.0 ng/mL。

10.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

11.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

12.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

13.  有效期:6个月