实时荧光PCR试剂盒的使用注意事项概述

　　实时荧光PCR试剂盒，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。随着PCR反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃，运用该项技术，可以对DNA、RNA样品进行相对定量、定量和定性分析。

　　实时荧光PCR试剂盒概述：

　　1.是采用SYBRGreenI嵌合荧光法进行RealTimePCR的试剂。产品中含有RealTimePCR反应的适浓度SYBRGreenI，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单。

　　2.Buffer经过优化改良，可以抑制非特异性反应，能够在更广的范围内进行准确定量。

　　3.可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对目的基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。

　　4.其中荧光定量MIX中已经添加合适浓度的荧光定量ROX校正染料，实验时无需额外添加，直接可以进行ROX校正实验。

　　实时荧光PCR试剂盒注意事项：

　　1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。

　　2.为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。

　　3.每次实验应该设置阴、阳性对照。

　　4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。

　　5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在*次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。

　　6.为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。

　　7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。

　　8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。

　　9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。