降钙素ELISA试剂盒操作时有哪些步骤是值得注意的？

　　降钙素ELISA试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附检测技术，测定样品中人降钙素原水平，向预先包被了抗人降钙素原抗体的酶标孔中，加入标准品和样本，温育后，加入标记的抗降钙素原抗体，再与HRP标记的链霉亲和素结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB，产生蓝色，并在酸的作用下转化成黄色，在450nm处测定反应孔样品吸光度值，样本中的人降钙素原浓度与OD值成正比，通过绘制标准曲线计算出样本中人降钙素原的浓度。

　　降钙素ELISA试剂盒操作步骤：

　　1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100，余孔分别加标准品或待测样品100，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37温育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

　　2、弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100（临用前配制），酶标板加上覆膜，37温育1小时。

　　3、弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

　　4、每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100，加上覆膜，37温育1小时。

　　5、弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

　　6、每孔加底物溶液90，酶标板加上覆膜37避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。

　　7、每孔加终止溶液50，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。

　　8、立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（值）。

　　降钙素ELISA试剂盒在人体内，主要由甲状腺的滤泡旁细胞(也称为C细胞)产生，在其他动物中，由末咽体产生，它的作用是降低血钙(Ca2+)，抵抗甲状旁腺激素(PTH)，在鱼类、爬行动物、鸟类和哺乳动物中发现了降钙素。