猪白细胞介素4（IL-4）试剂盒使用原理

猪白细胞介素4（IL-4）试剂盒使用原理

使用目的：
本猪白细胞介素IL-4试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素 -4（IL-4）含量。

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪白细胞介素 -4（IL-4）水平。用纯化的猪白细胞介素-4（IL-4）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-4（IL-4），再与 HRP标记的白细胞介素 -4（IL-4）抗体结合，形成抗体 -抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。 TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素 -4（IL-4）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（ OD值），通过标准曲线计算样品中猪白细胞介素 -4（IL-4）浓度。

标本要求
．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。

操作步骤
.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 0μl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。
4.配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用
5.洗涤：猪白细胞介素IL-4小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀， 37℃避光显色5分钟.
0.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
.测定：以空白空调零， 450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。