降低组织非特异性染色

如何zui大限度地降低组织非特异性染色？

（）缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是zui重要的一条。

（2）一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。

（3）内源性过氧化物酶和在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；

（4）非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；

（5）缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等；

（6）适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；

（7）防止标本染色过程中出现干片，这容易增强非特异性着色。

苏木素复染时间的把握？

（）苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟。不过这个如果染色不理想可以补救的。即：染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。

（2）盐酸酒精是分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置于盐酸酒精中数秒（一定动作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返兰即可。抗体

（3）如果分化的颜色过浅，可以复置于苏木素中染色。