修饰性工具酶

修饰性工具酶

（一）末端转移酶（terminal transferase）

l 末端转移酶是一类不依赖于DNA模板的DNA聚合酶。ELISA试剂盒

l 特性：该类酶可以在没有模板链存在的情况下，将核苷酸连接到dsDNA或ssDNA的在3’－OH。特别是对于平末端的双链DNA末端加尾十分有用。

l zui常见的用途：给外源DNA片段及载体分子加上互补的同聚物尾巴，以创造黏性末端，便于重组。

（二） SI核酸酶（SI nuclease）

这是一种从米曲霉（Aspergillus oryzae）中分离的高度单链特异的外切酶。

活性：可以降解单链DNA或RNA或双链的单链区。

其主要用途有：

⑴　在cDNA合成过程中，切开cDNA的发夹末端；

⑵　载体构建过程中，切去DNA片段的单链尾巴，ELISA试剂盒

形成平末端结构。

（三）碱性磷酸酶

从大肠杆菌中分离的细菌碱性磷酸酶（Bacterial Alkaline Phosphatase）简称BAP。

从小牛肠中分离的叫小牛肠碱性磷酸酶（ Calf Intestinal Alkaline Phosphatase） ，简称CIP，用的广泛。

酶催功能：

脱磷酸作用，将单链或双链DNA或RNA5’－P转化成5’－OH。

其主要用途有：

⑴在用32P标记DNA 5′端之前，去除5′端的磷；ELISA试剂盒

⑵在DNA重组技术中，去除DNA片段的5′磷酸，防止载体的自身环化，提高重组子比例。