ELISA方法的基本类型和操作程序分析

ELISA试剂盒价格根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA,称为斑点ELISA（Dot-ELISA）;再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA，称为布ELISA（C－ELISA）。在微量板ELISA中，又根据其性质不同分为间接ELISA、双抗体夹心ELISA、双夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA及抗体捕捉ELISA。

ELISA方法的基本类型有以上8种，常用的有间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法和双夹心ELISA法三种：

.间接ELISA

ELISA试剂盒价格本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。 （） 材料 　　① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液； 　　② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清； 　　③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。 　　（2） 方法步骤 　　① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干 　　② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干 　　③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干 　　④ 加底物液　→ 37℃ 30分钟，加终止液 　　⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。 　　（3） 结果判定　已知阳性血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.，而且已知阳性血清的OD值≥0.4；在上述条件成立的情况下，如果待检血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。

2.双抗体夹心ELISA

本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的双夹心抗体ELISA为例介绍本法的操作程序。 　　① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干 　　② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干 　　③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干 　　④ 加底物液　→ 37℃ 5分钟，加终止液 　　⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

3.双夹心ELISA

ELISA试剂盒价格此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为： 　　① 加抗体（Ab-）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干 　　② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干 　　③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（Ab-2）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干 　　④ 加入酶标抗Ab-2抗体（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干 　　⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液 ⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。