雌二醇Elisa试剂盒的原理及操作步骤

　　雌二醇Elisa试剂盒中的雌二醇是卵巢分泌的类固醇激素，是主要的雌性激素，负责调节女性特征、附属性器官的成熟和月经-排卵周期，促进乳腺导管系统的产生，雌二醇是人体一种重要的黄体解体剂，雌二醇主要是卵巢滤泡和胎盘的睾酮合成的，在肾脏也能合成少许，睾酮与雌二醇的转换是芳香酶系统完成的，血浆中雌二醇是一种动态过程。

　　将雌二醇抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的雌二醇与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入化的雌二醇抗体，将未结合的化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次*洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌二醇呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，计算样品浓度。

　　加一定稀释的待检样品0.ml于雌二醇Elisa试剂盒中，置37℃孵育小时。然后洗涤，同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔。

　　用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为～0μg/毫升。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.ml，4℃过一夜。次日弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

　　加酶标抗体于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.毫升。37℃孵育0.5～小时，洗涤。

　　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.ml，37℃0～30分钟。

　　终止反应于各反应孔中加入2M硫酸0.05毫升。