间接法步骤:
() 抗原包被:用包被液将PEDV抗原作∶5稀释包被反应板,每孔00μl,同时设阴性细胞培养物对照孔,置4℃过夜。
(2) 洗涤:用洗涤液洗涤2次,每次2min,沥干。
(3) 加入被检血清:用保温液将被检血清作∶00稀释,加入反应板相邻的两个孔中,每孔00μl。同时作阴、阳性标准血清对照,置37℃孵育h。
(4) 洗涤3次:方法同上。
(5) 加入酶结合物:用保温液将酶结合物作∶4 000稀释,加入反应孔中,每孔00μl,置37℃孵育h。
(6) 洗涤3次:方法同上。
(7) 加入底物:每孔00μl,置室温暗盒内显色20min。
(8) 加入终止液:每孔50μl,静置5min。
(9) 测定OD值:用检测仪,于492nm波长,按仪器使用及制定标准要求调节仪器,测定各反应孔的OD值,记录结果。
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