阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱的几个问题:
、不当储存或储存引起试剂活性丧失。
2、加入组织裂解液过量。
3、样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。
4、模板加入量不适合。
5、PCR循环数不足。
解决方法:
、使用新鲜的试剂。
2、增大反应体系,或减少裂解液的用量。
3、裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
4、在反应体系0-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于0%的范围。
5、适当增加PCR的循环数,在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-0个循环为佳。
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