等孢球虫通用PCR检测试剂盒准备试剂与收集血样

准备试剂与收集血样：
双重核酸试剂盒（荧光PCR法） .  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。
2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 20 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 20 0ng/ml 的标准品溶液 00ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。
3.  0× 标本稀释液用蒸馏水作 : 0 倍稀释（ 示例： ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。
4.  洗涤液：用重蒸水 :20 稀释（示例：ml 浓缩洗涤液加入 9ml 的重蒸水）
检测程序：
.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 00ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 20 分钟。
2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。
3.  每孔中加入抗体工作液0 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶标抗体工作液00ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液00ul ，置 37   ℃ 暗处反应5 分钟。
8.  每孔加入00ul 终止液混匀。
9.  30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。
 非特异产物及电泳呈涂布状
.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度，缩短退火或延伸时间