小鼠ELISA试剂盒采用双抗体夹心ELISA法,用抗小鼠INS抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的小鼠INS会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入化的抗小鼠INS抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。
抗小鼠INS抗体与结合在包被抗体上的小鼠INS结合、与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,INS浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中INS的浓度。
Elisa试剂盒实验反应时间注意事项:
、在备孔稀释好待测样品和标准品;
2、上板:应从后一孔上完板开始计时,以确保反应时间;
3、加底物:应从加第一孔开始计时,以确保加终止液时的反应时间是5分钟。
小鼠ELISA试剂盒注意事项:
)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。