操作步骤:
. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔0孔,在di一、第二孔中分别加标准品00μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取00μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为80 ng/L,20 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,5 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品0μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色5分钟.
0. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后5分钟。
过氧化物酶(GPX)微量法0.2g或者0.2mL
硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)微量法0.2g或者0.2mL
S-转移酶(GST)微量法0.2g或者0.2mL
还原酶(GR)微量法0.2g或者0.2mL
硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)微量法0.2g或者0.2mL
γ-谷氨酰半连接酶(GCL)微量法0.2g或者0.2mL
γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性测定微量法0.2g或者0.2mL
抗坏血酸(AsA)含量微量法0.2g或者0.2mL
脱氢抗坏血酸(DHA)含量微量法0.2g或者0.2mL
L-半乳糖苷-,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)微量法0.2g或者0.2mL
抗坏血酸氧化酶(AAO)活性测定微量法0.2g或者0.2mL
抗坏血酸过氧化物酶(APX)测定微量法0.2g或者0.2mL
单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)微量法0.2g或者0.2mL
脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性测定微量法0.2g或者0.2mL
二胺氧化酶(DAO)测试盒微量法0.2g或者0.2mL
铜蓝蛋白(Cp)含量测试盒微量法0.2g或者0.2mL
植物总酚(Tp)测试盒微量法0.5g或者0.2mL
植物原花青素(OPC)测试盒微量法0.5g或者0.2mL
尿酸(UA)含量测试盒微量法0.2g或者0.2mL
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