ELISA试剂盒实验条件的选择

　　在ELISA试剂盒实验中，选择各种实验条件至关重要，包括：

　　一、固相载体的选择：许多物质可以作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯和聚丙烯。酰胺和纤维素等。其形式可为凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。无论什么样的载体，在使用前都可以进行筛选：用等量的抗原包，在同一实验条件下反应，观察其显色反应是否均匀，判断其吸附性能是否良好。

　　二、包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，纯度好，吸附时一般要求PH在9.0-9.6之间。吸附温度、时间及其蛋白质量也有一定的影响，一般采用4℃、8-24小时。蛋白质包的较佳浓度需要滴定：用不同的蛋白质浓度(0...0和0μg/ml等)包定后，在其他试验条件相同的情况下，观察阳性标本的OD值。选择OD值较大、蛋白量较少的浓度。大多数蛋白质通常为-0μg/ml。

　　三、酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA试剂盒法进行初步效果的DDT(见酶标记抗体部分)。然后固定其他条件或采用方阵法，正式实验系统正确滴下其工作浓度。

　　四、酶的底部物质和氢化物质的选择：氢化物质的选择要求有明显的显色反应，但本身没有颜色。有些氢体(OPD等)具有潜在致癌作用，应注意防护。有条件的人必须使用不致癌、敏感度高的氢气体。例如TMB和ABTS是目前令人满意的氢气体。底部作用一段时间后，应加强酸或强碱终止反应。通常，底部的作用时间建议是0-30分钟。底部物质的使用液必须新鲜配制，特别是在使用前加入过氧化氢水。（内容仅供参考，有问题或遇到问题请在线咨询，我们会竭诚为您服务）