​羊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤

实验方法步骤:

方法

1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。

3结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。

小鼠神经干细胞（EGFP标记）

人脑微血管内皮细胞

人脑血管平滑肌细胞

人海马神经元

人少突胶质细胞

人星形胶质细胞

小鼠成纤维细胞（EGFP标记）

mCF, 小鼠心脏成纤维细胞

MN-c, 小鼠皮质神经元

MN-h, 小鼠海马神经元

MSC, 小鼠雪旺细胞

MA, 小鼠星形胶质细胞

MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞

mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞

CSC, 小鼠心肌细胞

mEPC, 小鼠内皮祖细胞-骨髓

MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞

NSC，大鼠神经干细胞

RN-h, 大鼠海马趾神经元

rEPC，大鼠内皮祖细胞-骨髓

RN-c, 大鼠皮质神经元

RN-s, 大鼠纹状体神经元

RSC, 大鼠雪旺细胞

RA, 大鼠星形胶质细胞

RLF, 大鼠淋巴成纤维细胞

rRTEC, 大鼠肾小管上皮细胞

rCSC, 大鼠心肌细胞

RDFs, 大鼠真皮成纤维细胞

RLFs, 大鼠肺成纤维细胞

rCF, 大鼠心脏成纤维细胞

MN-h, 小鼠海马神经元

MN-s, 小鼠纹状体神经元

mOPC, 小鼠少突胶质前体细胞

MA, 小鼠星形胶质细胞

MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞

mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞

CSC, 小鼠心肌细胞

小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）

MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞