植物1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)试剂盒操作步骤:
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。
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