原理:将血清脂蛋白用脂类染料(如苏丹黑或油红O等)进行预染。再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。通电后,脂蛋白向正极移动,并分离为几个区带。
操作:
.预染血清:血清0.2ml加苏丹黑染色液0.2ml于小试管中,混合后置37℃水浴染色30分钟,然后离心(2000转/分,约5分钟)。
2.制备琼脂糖凝胶板:将已配制的0.45%琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化,用吸管吸取凝胶溶液浇注载玻片,每片2.5ml,静置约半小时后凝固(天热时需延长,可放冰箱数分钟加速凝固)。
3.点加血清:已凝固的琼脂糖凝胶板的一端约2cm处,用切口刀片垂直切入凝胶后立即取出,然后用铜丝小匙将长方小条凝胶取出。以小片滤纸吸干小槽中水分,用血色素吸管吸取经过预染的血清约5μl,注入凝胶板上的小槽内。
4.电泳:将加过血清的凝胶板平行放入电泳槽中,样品应在阴极一端。两块三层纱布于缓冲液中浸润,然后轻轻紧密贴在凝胶板两端,纱布的另一端浸于电泳槽内的缓冲液(注意:此电极缓冲液不能用三羟甲烷缓冲液代替)。接通电源,电压为20~30V,每片电流为3~4mA。约经电泳5至55分钟,即可见分离之色带。
结果及临床意义:
.正常人血清脂蛋白可出现三条区带,从负极到正极依次为β-脂蛋白(zui深)、前β-脂蛋白(zui浅)、α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些),在原点处应无乳糜微粒。
2.如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深,结合血清甘油三酯明显升高和正常或略高,可以定为Ⅳ型高脂蛋白血症。
3.如果β-脂蛋白区带比正常血清明显深染者,同时结合血清总明显增高、甘油三酯正常者为Ⅱa型;若结合血清总增高而甘油三酯略高的前β略溶者为Ⅱb型。
4.结果β-和前β-两区带分离不开连在一起称“宽β区带”,结合血清甘油三酯和均有所增高,可定为Ⅲ型。
5.如果原点出现乳糜微粒,β,前β均正常或减低,结合血清甘油三酯明显升高,可定为Ⅰ型。
注意事项:
.电泳样品要求为新鲜的空腹血清。
2.每一块凝胶上可平行挖两条小槽,因而可加两个样品。
3.如果用一形状大小和小槽一样的有机玻璃片,在琼脂糖胶凝固前固定于适当位子上,当凝固后取出有机玻璃片,凝胶板上留下小槽可直接加样,不需挖槽。
4.如果需要保留电泳样本,可将电泳后之凝胶板(连同玻片)放于清水中浸泡脱盐2小时,然后放烘箱(80℃左右)烘干即可。蛋白
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