常见细胞洗涤液的配制方法

)训练目的

掌握Hank’s、O．0l mol／L PBS两种常见细胞洗涤液的配制方法。

2)实验原理

    Hank's、0．Ol mol／L PBS两种是细胞培养中常用到的基础液。常用于洗涤离心后的细胞沉淀以及培养基等用液的溶剂。Hank's和0．0mol／L PBS两种BSS液因其不含对高温高压敏感的物质，故可以采用湿热灭菌法灭菌。

3)实验材料

①器材：高压蒸汽灭菌锅、pH计、烧杯( 000 mL)、容量瓶( 000 mL)、瓶、滤纸、一次性0．22μm塑料微孔滤膜。

②试剂：CaCl2、MgSO4·7H20、葡萄糖、KH2PO4、Na2HPO4·H20、新鲜制备的三蒸水、74％NaHC03、KCl、Na2HP04。

4)操作步骤

()Hank's液的配制和无菌处理Hank's液的配方。

①准确称取O．49CaCl2溶解在装有00 mL三蒸水的烧杯中。

②准确称取O．20 g MgSO4·7H2O溶解在含00 mL三蒸水的另一烧杯中。

③按配方(表5．)准确称取其他试剂依次溶解在盛有650 mL三蒸水的烧杯中，注意应待前一种试剂*溶解后，再溶解下一种成分，混匀。细胞

④将①、②液缓慢倒人③中，并不时搅动，防止出现沉淀。

⑤将0．35 g NaHC03溶解在37℃00 mL三蒸水中。

⑥用数滴NaHC03液溶解O．02 g酚红。

⑦将⑤、⑥液逐滴并搅拌加入到④液中。

⑧将⑦液移人容量瓶中，补加三蒸水定容至 000 mL，然后充分混匀。

⑨用O．22μm微孔滤膜过滤除菌后分装，4℃冰箱内保存；或者先分装后，再用8磅0 min高压蒸汽灭菌，贴上标签后于4℃冰箱内保存。

(2)O．0 mol/L PBS的配制

①准确称取NaCl 8．O g、KCl 0.2 g、Na2HPO4.5 g(如为Na2HPO4·2H20，则为2．89 g)、KH2P04 0．2 g。

②将上述试剂依次溶于 000 mL去离子水中，*溶解后，5℃高压灭菌0～5 min，4℃冰箱储存备用。细胞