检测淋巴母细胞的IL一2受体

．原理有丝分裂原可以使淋巴细胞转化为淋巴母细胞。淋巴母细胞表达丰富的IL一2受体，该细胞在体外IL一2存在时能连续培养，并与IL一2含量呈剂量依赖关系。它对有丝分裂原无反应性或反应极微。因此，在无IL-2依赖细胞株的情况下，可以用此细胞作IL一2检测。

2．材料

()IL-2待测样品，用0％FCS RPMI 640培养液倍比稀释。

(2)IL一2、刀豆蛋白A(ConA)标准品。

(3)C57BL／6小鼠。

(4)3 H—TdR(0．5 μci／50μl)。

(5)闪烁液。

(6)9999型玻璃纤维滤纸。

(7)细胞收集仪。

(8)8液闪计数仪。

3．方法

()取C57BL／6小鼠脾脏磨碎后，配成5×06／ml单个细胞悬液。

(2)加入ConA 5 μg／ml，37℃、5％CO2孵箱中培养40～48h。

(3)将培养的细胞悬液置于淋巴细胞分层液上，700 r／mln离心5 min。取界面层细胞即为IL一2反应细胞(淋巴母细胞)。

(4)将反应细胞配成×06／ml的悬液，取00μl加入96孔微量培养板。

(5)加入00μl待测样品或IL一2标准品，37℃、5％CO2孵箱中培养40～48h。

(6)每孔加入O．5μci。H—TdR，37℃、5％CO2孵箱中培养4～6 h。

(7)收集细胞测定3 H—TdR掺人量。

4．结果分析以不同稀释度的IL一2标准品绘制标准曲线，从IL一2标准曲线上测得样品中IL一2的活性单位。

5．注意事项

()此法不必培养CTLL-2细胞。但由于动物的个体差异，往往使试验结果批次间差异较大。

(2)淋巴母细胞的诱导和分离技术不易掌握，有时容易混入较多的休止期小淋巴细胞，这些细胞仍保留对ConA的反应性。因此，作为检测细胞所含休止期小细胞不宜超过5%并应设ConA反应对照组。

(3)细胞培养收获的时间一般应以无IL一2的对照细胞绝大多数死亡，而加IL一2的实验组细胞生长旺盛时为佳。